Geneshow染料使用说明书
核酸 | 高于EB的灵敏度 |
DNA | 5—10倍 |
RNA | 8—16倍 |
寡核苷酸 | 4—8倍 |
Geneshow 是本公司开发的新型核酸染料,具有安全、灵敏等突出特点,可以作为各种核酸电泳的染色剂。与高致癌性的EB不同,Geneshow 属于花青类染料,毒性很低,使用安全。另外,Geneshow 检测核酸的灵敏度比EB染色法平均高10倍左右。见右侧表格。 与核酸结合的Geneshow 染料的最大吸收峰为495nm,另外,在紫外区300nm——380nm还有一个吸收峰。染料发射绿光荧光,最大发射波长为515nm。可以用Generadar(金锐达)系列可见光凝胶透射仪观测。也可用紫外凝胶透射仪观测,效果稍差,但灵敏度等仍好于EB。
一.使用方法:
方法一:用含染料的凝胶进行电泳染色法
制胶: 按常规操作,制备琼脂糖凝胶,凝胶熔化后,加入10000×Geneshow 染料,使染料在凝胶中的终浓度为1×,(即如果制备50ml凝胶,加入染料5ul)。轻轻摇匀,倒胶。
电泳、观测:按常规方法电泳,观测。
提示:采用本方法电泳,如果样品的核酸量较大,会导致样品带型不整、并且影响样品的相对迁移率。本方法仅适用于含核酸量较小的样品,如PCR产物、低浓度Marker(商品Marker稀释5—10)、低浓度的质粒、低浓度基因组核酸、及其他任何核酸量较小的样品。如果样品的核酸量较大,请使用“方法二”和“方法三”。
方法二:电泳后染方法:
按照常规方法进行电泳。
用PH 7.0 — 8.5 的缓冲液(如:TAE,TBE 或 TE),按照10000:1的比例稀释Geneshow 染料浓缩液,混匀,制成染色溶液,。
将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中,放入凝胶,用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色10—45分钟,染色时间因凝胶浓度和厚度而定。凝胶越厚、浓度越高,所需染色时间越长。对于聚丙烯酰胺凝胶,可以直接在玻璃平皿上染色(玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理,避免染料吸附在玻璃表面上)。将配好的工作溶液轻轻地倒在胶板上,让工作液均匀地覆盖整个胶板,并染色10—30分钟。
二.其它说明:
该染料为花青类染料,没有致癌性,但有可能会刺激皮肤和眼睛。操作时应戴手套。
染料从冰箱中取出后应恢复至室温,使溶液充分融化,并混匀。
在常规用酒精沉淀核酸的过程中,Geneshow 可以全部从双链核酸上去掉。
使用校正液可以消除染料对电泳迁移率的影响,基本可以准确判断未知样品的分子量。
加入染料的凝胶可反复熔化使用,但会使检测灵敏度下降。
Geneshow 对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙烯类容器。
储存:室温 有效期至少二年。
本品仅供科研使用。