SYBR Green I （电泳用）

SYBR GreenⅠ核酸染料（电泳用）

品名：SYBR GreenⅠ

品牌：金博益

浓度：10000×50ul  in DMSO

货号：GBY-4

保存：-20℃

包装：50ul

一.简介

SYBR Green I是高灵敏的DNA荧光染料，适用于各种电泳分析，操作简单：无须脱色或冲洗。至少可检出20pg DNA，高于EB染色法10—25倍。SYBR Green I 与dsDNA 结合荧光信号会增强800—1000倍，用SYBR Green I染色的凝胶样品荧光信号强，背景信号低。可适用于多种电泳分析。

SYBR Green I 适合于多种凝胶电泳方法：琼脂糖凝胶，聚丙烯酰胺凝胶电泳，脉冲电场凝胶电泳，和毛细管电泳等。

SYBR Green I 与双链DNA的亲和力非常高，因此可以用做电泳前染色，对分子生物学中常用的酶（如：Taq 酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶等）没有抑制作用。另外，SYBR Green I 与EB相比，诱变能力大大降低。

二．SYBR GreenⅠ预染色方法：

该方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳

操作步骤

1. 工作液的配制：用电泳缓冲液将10000×的SYBR GreenⅠ稀释100倍，即为SYBR GreenⅠ工作液。SYBR GreenⅠ工作液可以置2—8℃冷藏一个月以上。

2. 制胶：按常规方法制胶，不含任何染料。

3. 样品染色：向分析样品中加入SYBR GreenⅠ工作液和载样缓冲液，室温放置3-5分钟，使SYBR GreenⅠ与样品中DNA充分结合。SYBR GreenⅠ工作液加入量为总上样量的1/10。

4. DNA Marker染色：将5μL DNA Marker和1μLSYBR GreenⅠ工作液混匀，室温放置5分钟，使SYBR GreenⅠ与DNA充分结合。

5. 上样、电泳：按常规操作。

使用说明：

1. 该方法的灵敏度比SYBR GreenⅠ后染法低，灵敏度与EB染色并配合紫外观测相当。

2. SYBR GreenⅠ预染色会影响Marker及样品的相对迁移率，如进行酶切分析等需要准确分析分子量大小的实验，可以用SYBR GreenⅠ电泳后染色。

3. 该方法适用于PCR产物分析等多数分子生物学实验，由于整个实验过程不会对核酸样品产生任何损害，该方法适用于凝胶中核酸的回收。

4. 在“SYBR GreenⅠ预染色方法”中，电泳时间不要超过2小时，否则SYBR GreenⅠ会从DNA上分离出来，会产生弥散状条带。

三．SYBR GreenⅠ后染方法：

操作步骤

1. 按照常规方法进行电泳。

2. 用PH 7.0-8.5 的缓冲液（如：TAE，TBE 或 TE），按照10000：1的比例稀释SYBR GreenⅠ浓缩液，混匀，制成染色溶液。

3. 将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中，放入凝胶，用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色10—30分钟，染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上染色，玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理（避免染料吸附在玻璃表面上）。将配好的工作溶液轻轻地倒在胶板上，让工作液均匀地覆盖整个胶板，并染色30分钟。

4. 用金锐达可见光透射仪观测。蓝光可透过玻璃，观测聚丙烯酰胺凝胶时，可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入金锐达可见光透射仪内观测。

使用说明：

1. 染色溶液可以冷冻避光储存，可以在一个星期内重复使用4次。

2. SYBR GreenⅠ后染方法适用各种凝胶分析适用，检测灵敏度高，至少可以达到20pg的DNA条带。

四．SYBR Green I使用注意事项：

1. 在常规用酒精沉淀核酸的过程中，SYBR Green I 可以全部从双链核酸上去掉。

2. 如果想对用 SYBR Green I 染过的胶进行 Southern blots，建议在预杂化和杂化溶液中加入 0.1%— 0.3% 的SDS。

3. 在紫外照射透视下，与双链 DNA 接合的 SYBR Green I 呈现绿色荧光。如果胶中含有单链 DNA 则颜色为橘黄而不是绿色。

4. SYBR Green 对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙烯类容器。